LC-MS／MS法同时检测人血浆及尿液中头孢哌酮和三唑巴坦含量

【作者】 郭蓓宁； 武晓捷； 陈章景； 张菁；

【机构】 复旦大学华山医院抗生素研究所；

【摘要】 目的建立头孢哌酮和三唑巴坦(Cefoperazone,Tazobactam)浓度同步测定的高效液相色谱-串联质谱(LC-MS／MS)测定法,用于人体药代动力学研究。方法以头孢呋新为内标,用LC-MS／MS法同时测定血浆及尿液中头孢哌酮和三唑巴坦的含量。仪器为Waters Alliance 2690液相色谱系统,Finnigan TSQ Quantum 串联质谱仪。色谱条件:分析柱为Waters Atlantis dC18柱(150×2．1mm,5 μm);流动相:2mM甲酸铵: 甲醇=60:40;流速0．2ml／min;进样体积5 μl。ESI负离子SRM扫描,头孢哌酮检测通道:m/z644．1→m／z 528．0,三唑巴坦检测通道:m／z 299．1→m/z 138．0 m／z,内标检测通道:m/z 423．0→m/z 362．0 m／z。在该色谱条件下,头孢哌酮、三唑巴坦和内标的保留时间分别为4．2min、2．5 min和3.6min。血浆样品预处理采用3倍体积乙腈沉淀蛋白,上清液N2吹干,流动相重建后进样分析;尿液样品采用5倍体积甲酸铵缓冲液稀释并离心后直接进样。结果血浆和尿液中头孢哌酮在0．02-20 μg／ml范围内线性关系均良好 (r2>0．999),样品提取回收率分别为(96．41±4．02)％％和(102．30±8．10)％;三唑巴坦在0．01-10 μg／ml范围内线性关系均良好(r2>0．999),样品提取回收率分别为(91．55±4．02)％和(99．60±3．31)％。头孢哌酮高、中、低浓度质控(18、6和0．3μ g／ml)血浆样品的天内、天间及周间相对标准偏差分别为≤2．98％、≤2．87 ％和≤2．48％,尿液样品的天内、天间及周间相对标准偏差分别为≤10．22％、≤5．46％和≤5．30％,三唑巴坦高、中、低浓度质控(9、3和0．15μg／ml)血浆样品的天内、天间及周间相对标准偏差分别为≤8．08、≤4．94％和≤5．13％,尿液样品的天内、天间及周间相对标准偏差分别为≤2．16％、≤3．41％和≤2．66％。稳定性试验表明样品室温下放置或处理后放置12h及-80℃冻融3次对测定结果无影响,1．25 u／ml肝素对测定结果无影响。在信噪比为10:1时,头孢哌酮和三唑巴坦的检测灵敏度分别可达2．5和0．2 ng／ml左右。结论建立的液相色谱-串联质谱(LC-MS／MS)测定法,样品处理简单、灵敏度高,可同时检测血浆或尿液中的头孢哌酮和三唑巴坦浓度,为临床研究药代动力学提供了简捷、准确的分析测定方法。更多还原