李氏杆菌溶血素基因的表达及活性分析

【作者】 张杰； 骆学农； 郑亚东； 李辉； 伏小平； 朱小玲；

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室； 甘肃农业大学动物医学院；

【摘要】 目的:获得具有良好生物活性的产单核细胞李氏杆菌(LMO)溶血素重组融合蛋白。方法:根据LMO溶血素基因hlyA设计引物,PCR扩增hlyA,将扩增产物与pMD18-T连接,重组质粒经酶切鉴定、PCR分析以及确证性测序。将由重组质粒pMD18-hlyA上扩增的缺失信号肽序列的目的片断与表达载体pGEX-4T-1分别酶切连接后,转化BL21细胞。筛选阳性克隆,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot分析,纯化重组融合蛋白进行溶血试验、小鼠致病力试验和间接ELISA分析。结果:hlyA基因在大肠杆菌中成功表达分子量82ku的融合蛋白,能裂解红细胞。一定剂量腹腔注射能将小鼠致死。且能被LMO阳性血清所识别。以此为包被抗原的间接ELISA可以将LMO阴、阳性血清分开。结论:GST-LLO融合蛋白具有良好的生物活性,为建立基于重组抗原的免疫诊断试剂盒奠定了基础。更多还原