广西猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5、ORF6和ORF7基因的克隆、序列分析及分子流行病学调查研究

【作者】 陈樱； 黄伟坚； 罗廷荣； 刘芳； 温荣辉； 陆芹章； 廖素环；

【机构】 广西大学动物科学技术学院；

【摘要】 根据美洲株VR2332和中国CH-1a株基因序列分别设计合成了3对针对ORF5．ORF6和ORF7基因特异性引物．利用RT-PCR方法从广西送检病料中检测到12份阳性病料(包含精液、流产死胎、肺门淋巴结、肾脏),分别扩增得到大小为668bp、582bp、443bp的片段,将其插入pMD18-T载体并测序．与国内外已发表的毒株和疫苗株(MLV,RospPRRS MLV、MLV RespPRRS／Repro)、欧洲代表株相比,与CH-1a、HB-1、 FJ-1、BJ-4、VR-2332、NVSL、P129、疫苗株相比的ORF5、ORF6、ORF7基因的核苷酸同源性为87．2-97．3%． 90．1-97．9%、90．1-98．4%,氨基酸同源性为85．1-96．0%、92．0-97．1%、87．9-96．8%．与LV株序列相比核苷酸分别为62．2-64．0%、68．2-68．8%、65．6-67．5%,氨基酸同源性分别为55．7-56．2%75．9-78．2%、 55．6-58．9%．遗传进化树表明广西流行毒株分别属于3个亚群I、II、IV,12株属于II亚群．其中GXWX 株与美国准种变异代表株B2亲缘关系较近,其他毒株与HB-2株的亲缘关系较近．推导ORF5基因编码氨基酸序列分析发现,12个毒株与疫苗株无相关,均源自野毒株:除GXWX外,其余11株均具有病毒亚群特征; 主要抗原表位发生变异,以胞外区(27-41aa)变异较为明显．更多还原