猪附红细胞体特异性PCR诊断方法的建立与鉴定

【作者】 王承民； 何宏轩； 秦建华； 陈桂香； 赵坤； 杭柏林； 姚四新； 王丽荣；

【机构】 河南科技学院细胞工程重点实验室； 中国科学院动物研究所国家野生动物疫病研究中心； 河北农业大学动物科技学院；

【摘要】 建立一种检测猪外周血中附红细胞体的特异性PCR诊断方法．方法:从猪血中分离附红细胞体, 提取其基因组DNA,用EcoRl对基因组DNA进行酶切,将酶切片段进行琼脂糖电泳,得到一个1．8 kb的 DNA片段,根据DNA序列分析与GENE bank已知基因比较和PCR方法确定该片段具有特异性,以该片段为模板进行PCR,并将其扩增产物与其它猪的其他细菌DNA扩增产物相比较．建立该诊断方法,并通过临床应用检验该法的适用性．扩增出一个782 bp的产物,通过斑点杂交实验确认该产物,将该方法应用于检测10 头临床症状典型的感染猪和10头健康猪的血液,所有感染和隐性带菌猪的PCR检测结果为阳性,健康猪为阴性。该PCR诊断方法在检测无临床症状的隐性带菌动物具有一定的适用性。更多还原