猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫检测方法的研究

【作者】 张浩吉； 谢明权； 张健騑； 蒲文珺； 覃宗华； 蔡建平； 王政富； 顾万军；

【机构】 佛山科学技术学院动物医学系； 广东省农科院兽医研究所；

【摘要】 以猪附红细胞体和多种血营养菌16S rRNA基因的保守区设计合成引物HM-f／HM-r,在反向引物5’端用生物素标记,以猪附红细胞体广东株16S rRNA基因的可变区设计种特异性寡核苷酸探针,探针5’端用地高辛标记,通过扩增产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合．然后与地高辛标记的E．suis种特异性探针杂交,再与辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体反应和相应的底物进行检测,成功地建立了猪附红细胞体PCR-微孔板杂交-酶免疫法检测方法．通过测定不同浓度PCR产物对应的微孔板杂交-酶反应显色OD值, 用SPSS统计软件进行回归分析,得到回归方程为y=2．1012-0．4492×log(x),其相关系效R为0．977．显示对未知样品可进行定量检测．该方法与猪的多种细菌性病原、猫血巴尔通氏体CA株和牛的温氏附红细胞体无交叉反应,其敏感性比常规PCR琼脂糖电泳检测提高了近100倍．应用实验建立的方法,对38份临床样品进行检测,结果有12份检测结果为阳性．更多还原