绿色荧光蛋白在秀丽隐杆线虫中的表达

【作者】 庞林海； 杜爱芳； 侯玉慧； 高翔； 周前进； 孔德翔； 赵现锋；

【机构】 浙江大学动物预防医学研究所；

【摘要】 为探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在秀丽隐杆线虫体内的异源表达,以及电穿孔技术在线虫基因转化中应用的可能性,根据秀丽隐杆线虫Act-1基因序列设计引物,以其基因组DNA为模板。进行 PCR扩增,成功扩增出Act-1启动子。将PCR产物与pUCm-T载体连接后,转化至DHSa感受态细胞,筛选出阳性克隆并测序-pEGFP-N1真核表达载体经双酶切去掉CMV启动子序列,补平自连成载体pEGFP-4．1 (4．1kb)．pEGFP-4．1和T载体上的Act-1启动子序列分别经双酶切,连接筛选阳性克隆,并进行酶切鉴定构成pAct—EGFP绿色荧光蛋白表达载体。通过电穿孔法转化秀丽隐杆线虫,通过PCR检测及激光共聚焦显微镜观察发现绿色荧光基因在虫体有明显的表达。真核表达载体pAct-EGFP的成功构建及表达,将为进一步研究莫定了良好的基础。更多还原