冷藏绵羊皮肤的成纤维细胞继代培养及冷冻保存

【作者】 刘欣； 张丽新； 梁洋； 安铁洙；

【机构】 东北林业大学生命科学学院；

【摘要】 随着体细胞克隆技术的完善,皮肤成纤维细胞必将作为核供体被广泛应用。为了探讨哺乳动物,特别是珍稀动物死亡一定时间后其皮肤成纤维细胞利用的可能性,从幼龄绵羊耳廓采集皮肤,在4℃条件下用mPBS液分别保存0 h(对照组)、24h、48h和72h后,用含有谷氨酰胺和胎牛血清的DMEM培养液进行原代和继代培养。此外,当各处理组在经原代培养达到100％汇合时, 以DMSO为冷动保护剂,采用常规方法进行冷冻-解冻后进行传代培养。其结果:(1)在4℃条件下保存0 h、24h、48h和72h的皮肤成纤维细胞原代培养后到达100％汇合时间分别为8d、9d、14d 和15d;(2)与对照组第1-4代培养时的100％汇合时间(均为4d)相比,虽然其它保存组的第1- 3代培养后达到100％汇合的时间滞后(为5-8d),但是,经4代培养后,100％的回合时间(4d) 与对照组无差异;(3)对于冷冻-解冻的原代细胞进行传代培养时,虽然在第1代各组间100％汇合时间不同步(11-13d),但是经第2代培养4d后均达到100％回合。上述结果表明,当绵羊死亡后立即采取其耳廓皮肤并用mPBS液在4℃条件下保存24-72h,经原代-传代培养(4代)或经原代- -冷冻-复苏培养-传代培养后,其成纤维细胞可恢复至具有新鲜耳廓成纤维细胞的传代能力。更多还原