SIRT1去乙酰化酶抑制剂调节肿瘤细胞多药耐药性的机制

【作者】 李咏； 杨啊晶； 张秀敏； 李电东； 何琪杨；

【机构】 中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所；

【摘要】 目的:观察 SIRT1去乙酰化酶抑制剂对肿瘤细胞多药耐药性的影响以及 SIRT1去乙酰化酶对多药耐药性 P-gp 表达的影响。方法:采用 MTT 比色法检测 SIRT1去乙酰化酶抑制剂 Nicotinamide（NAM）单独或与抗肿瘤药物合用对敏感人乳腺癌细胞 MCF-7和耐药细胞 MCF-7/DOX 细胞活性及增殖影响。Western blot 方法检测凋亡相关蛋白 PARP,caspase 的表达情况和耐药相关蛋白 P-gp 的表达变化。荧光显微镜检测（Hoechst33342染色）染色质凝集情况。 RT-PCR 法检测耐药基因 mdr-1的表达情况。流式细胞仪测定药物在细胞中的积聚和细胞周期分布。结果:SIRT1去乙酰化酶抑制剂 Nicotinamide（NAM）和 Sirtinol 对敏感人乳腺癌细胞 MCF-7和耐药细胞 MCF-7/DOX 表现出相同的敏感性,Sirtinol 对 MCF-7、MCF-7/DOX 的 IC₅₀ 值分别为65和80μmol/L;NAM 的 IC50值分别为21和24 mmol/L。但是,SIRT1去乙酰化酶抑制剂 NAM、Sirtinol 与常规抗肿瘤药物合用不能逆转肿瘤细胞的多药耐药性。用50 mM 的 NAM 处理 MCF-7、MCF-7/DOX 细胞12h,24h,48h 后,Western blot 结果可见在敏感细胞 MCF-7中,NAM 作用12h时,出现 PARP 切割片段和 Caspase7切割片段,在24h 达到峰值; 而在耐药细胞 MCF-7/DOX 中,24h 才出现 PARP 切割片断和 Caspase7切割片断,在48h 达到峰值;荧光显微镜镜检测结果可见50mM 的 NAM 作用24h 和48h 时在敏感细胞 MCF-7中和耐药细胞 MCF-7/DOX 中出现染色质凝集,形成凋亡小体。流式细胞术检测到50mM 的 NAM 作用 MCF-7和 MCF-7/DOX 细胞12h 就可引起凋亡,并引起 G₂/M 期阻滞。SIRT1去乙酰化酶激动剂 Resveratrol（RSV）可以诱导无 P-gp 表达的 MCF-7和 BEL-7402细胞表达产生 P-糖蛋白, 而 SIRT1去乙酰化酶抑制剂 NAM 和 Sirtinol 无此作用,Ⅰ、Ⅱ型组蛋白去乙酰化酶抑制剂 Trichostatin A 作为阳性对照。结论:SIRT1去乙酰化酶抑制剂可以克服肿瘤细胞多药耐药性, 诱导耐药细胞凋亡。在多药耐药性形成过程中,SIRT1去乙酰化酶参与 mdr-1的表达调节。更多还原