鼻咽癌肿瘤干细胞及其表面标志物初步研究

【作者】 邵世宏； 姚运红；

【机构】 广东医学院病理学教研室；

【摘要】 目的研究鼻咽癌中存有肿瘤干细胞的可能性,初步探讨鼻咽癌肿瘤干细胞的表面标志物,为针对杀灭肿瘤干细胞的治疗方法在鼻咽癌临床治疗中的应用提供依据。方法采用免疫组化SP法检测19例鼻咽粘膜慢性炎、33例鼻咽癌和28例鼻咽癌淋巴结转移组织中 E-cadherin、CD44H以及β-catenin的表达,检测各指标在鼻咽癌的发生发展和转移灶中的表达及其差异;体外培养人低分化鼻咽癌细胞系 CNE-2Z,平板克隆形成率实验观察CNE-2Z细胞生长增殖的情况;原代培养鼻咽癌组织,观察鼻咽癌细胞在体外生长增殖能力,采用免疫细胞化学检测鼻咽癌原代细胞以及CNE-2Z细胞中 E-cadherin、CD44H以及β-catenin的表达;复制 CNE-2Z裸鼠移植瘤模型,采用免疫组化SP法观察以上指标在移植瘤组织中的表达情况;通过对比各个指标在鼻咽癌组织、鼻咽癌原代细胞、人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z以及裸鼠移植瘤组织中的表达情况,初步探讨各指标在鼻咽癌发生发展中的作用以及能否成为鼻咽癌肿瘤干细胞的表面标志物。结果 (1)临床标本免疫组化结果: E-cadherin和CD44H在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性率分别为100％(19／19)、10．52％(2／19),在鼻咽癌中的阳性率分别为54．54％(18／33)、75．76％ (25／33),在鼻咽癌淋巴结转移灶中的阳性率分别为25.00％(7／28)、96．43％(27／28);β-catenin 在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌和鼻咽癌淋巴结转移灶中异常表达率分别为为110．53％(2/19)、48．48％ (16/33)和78．57％(22/28);其中E-cadherin、 CD44H在鼻咽癌中的表达与鼻咽粘膜慢性炎组以及鼻咽癌淋巴结转移组比较差异均有极显著性(P <0．001);β-catenin在鼻咽癌中的异常表达与鼻咽粘膜慢性炎组以及淋巴结转移组比较差异均有显著性(P<0．05)。(2)CNE2Z细胞有极强的克隆形成和致瘤能力,平板克隆形成率为(71．88± 4．52)％;裸鼠移植成功率为100％(3／3);100％表达CD44H的CNE2Z细胞在裸鼠移植瘤内可以分化产生CD44H(-)和CD44H(+)的细胞, 其表达和分布与人鼻咽癌组织相比差异无显著性 (P>0．05);E-cadherin和β-catenin在裸鼠移植瘤内的表达和分布与人鼻咽癌组织相比差异有显著性(P<0．05)。(3)鼻咽癌原代培养结果:采用组织块培养法对15例鼻咽癌新鲜组织进行原代培养,14例有癌细胞长出,随着培养时间的推移, 细胞数量慢慢减少,最后仅剩余极少量细胞存活下来;其中5例癌细胞长满瓶壁,对其消化传代后,3例癌细胞逐渐死亡,1例癌细胞不贴壁,呈悬浮生长,另一例可见一个克隆形成。本实验初步表明鼻咽癌中的确存在一小部分细胞能在体外长期存活并生长,这部分细胞可能对鼻咽癌的发生发展有着及其重要的作用。结论 (1)CD44H 高表达、β-catenin异常表达及E-cadherin的低表达可能对鼻咽癌的生长、增殖和转移起着重要的调控作用。(2)原代培养表明鼻咽癌中极有可能存在肿瘤干细胞,可能对鼻咽癌的发生发展起着重要的作用。(3)平板克隆形成率、裸鼠移植和免疫化学实验提示人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z 内CD44H阳性的细胞有着极强的增殖能力和成瘤能力,在裸鼠移植瘤内,CD44H阳性的细胞可以分化产生CD44H阴性和CD44H阳性的细胞, CD44H可能成为鼻咽癌肿瘤干细胞的表面标志。 (4)研究针对肿瘤干细胞的治疗方法在临床上是可行的。更多还原