【作者】 杨雯君； 赵旭东； 张陈平； 王铸钢；

【Author】 YANG Wen-jun, ZHAO Xu-dong, ZHANG Chen-ping, WANG Zhu-gang (Department of Oral & Maxillofacial Surgery, Affiliated 9th People’s Hospital, Shanghai Second Medical University , Shanghai 200011. Laboratory of Medical & Molecular Genetics, Department of Medical Genetics, Rui-Jin Hospital Affiliated |o Shanghai Second Medical University, Shanghai Research Center for Biomodel Organisms, Shanghai 200025, P.R. China.

【机构】 上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科； 上海第二医科大学医学遗传学教研室,上海南方模式生物研究中心；

【摘要】 目的克隆人PLAG1基因,构建PLAG1组织非特异性和特异性表达载体,并建立PLAG1转基因小鼠模型,研究PLAG1基因的高表达与唾液腺肿瘤发生的关系。材料与方法取PLAG1高表达的瘤组织或正常胎盘组织,提取总RNA,RT-PCR 扩增获得PLAG1 cDNA全部编码框序列。将PLAG1分别克隆至pCMV-EGFP 和pMMTV-EGFR-stop载体获得pCMV-EGFP／PLAG 1和pMMTV-PLAG 1表达载体。用pCMV-EGFP／PLAG1瞬时转染NIH3T3细胞以观察融合基因的表达及 PLAG1的细胞内定位。经显微注射分别获得pCMV-EGFP／PLAG1和 pMMTV-PLAG1转基因小鼠。结果从不同组织来源的RNA克隆的PLAG1 cDNA经测序后发现与GenBank 中的PLAG1基因(GenBank No．U65002)比较有一多态性位点,相应氨基酸由苏氨酸变为脯氨酸。构建的组织非特异性表达载体pCMV-EGFP／PLAG1和组织特异性表达载体pMMTV-PLAG1经酶切和测序鉴定,证实PLAG1序列及插入方向正确。用pCMV-EGFP／PLAG1转染NIH3T3细胞,在细胞水平证明PLAG1的表达及其在细胞核的定位。两种表达载体分别经显微注射,获得了多个转基因阳性小鼠(Founders,G0代),经交配繁育,建立了相应的转基因小鼠模型。转基因的表达分别经RT-PCR和Northern杂交证实。表型观察发现pMMTV-PLAG1转基因小鼠系M42在出生后3个月内,100％的阳性小鼠发生唾液腺肿瘤。结论从多个肿瘤标本及正常胎盘组织克隆的PLAG1基因在同一位置与 GenBank中的相应序列相比,发现相同的核苷酸变异,说明这种核苷酸的变异并非由肿瘤组织内的基因突变或PCR错配所致。可能是一个单核苷酸多态性(SNP) 位点。PLAG1在细胞内定位于细胞核,符合转录因子的细胞核分布规律。PLAG1 转基因小鼠的表型提示该基因的高表达与唾液腺肿瘤的发生密切相关。更多还原