三类TACE抑制剂作用的分子机理探讨

【作者】 王震； 王茵； 朱孔黎； 韩玲； 丁廷波； 杨渝珍；

【机构】 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系；

【摘要】 目的:以脂多糖(LPS)刺激的HL-60细胞系为炎症细胞模型,筛选肿瘤坏死因子-α转换酶(TACE)的抑制剂,为在基因水平人工干预炎症过程提供科学依据和手段,旨在开发和筛选以TACE为靶标的抗炎、抗肿瘤治疗新途径。方法:分时相刺激HL-60 细胞后,用分子生物学和细胞学技术在TACE基因表达的mRNA水平和蛋白质水平研究TACE 活性抑制及效果。实验中分别采用TACE基因亚克隆技术、RT-PCR技术、反义寡核苷酸阻遏技术、流式细胞术、化学合成小分子模拟底物肽、炎症模型动物中观察酶-底物竞争性抑制病理学效果等技术方法。结果:①将具有消炎解毒功能的自制纯中药注射液- 热毒清(RDQ)单独加入HL-60细胞共孵育不同的时间,对TACE mRNA表达不大,但却能明显降低LPS诱导的炎症细胞膜型中TACE mRNA转录量的增加(与对照组比P<0．01);②应用反义技术,设计的针对TACE mRNA的包括起始密码子AUG及其上游非编码序列在内的 21mers的反义寡核苷酸(anti-ODN),在翻译水平上有效地抑制了TACE基因的表达,抑制率大于78．9％;③我们自行设计和化学合成了一组针对TACE分子中催化结构域(即酶的活性中心)的小分子底物模拟肽(含能与Zn2+结合的羟圬基团),根据体内、外实验结果,筛选出若干效果明显化合物。其中DW105、DW110和DW124明显抑制LPS诱导的巨噬细胞膜表面TACE表达增加,从而抑制sTNFα(可溶性TNFα)分泌增加,减轻了LPS诱发的肝、肾等组织的炎性病理反应强度。更多还原