稳定表达SARS病毒N蛋白的减毒伤寒杆菌疫苗的研究

【作者】 罗风玲； 冯勇； 吴建国； 章晓联；

【机构】 武汉大学医学院免疫学系病毒学国家重点实验室； 武汉大学生命科学院病毒学国家重点实验室；

【摘要】 目的构建能稳定表达SARS病毒N蛋白的减毒伤寒杆菌疫苗, 并研究其免疫原性。方法构建含有伤寒杆菌毒力岛IVB型菌毛pilV基因及 SARS病毒N基因的重组质粒,转化入IVB型菌毛结构基因pilS基因缺失突变的减毒伤寒杆菌株pilS::kmr,利用同源重组将SARS病毒N基因整合插入到该菌株染色体的纤毛末端蛋白pilV基因中,得到稳定表达SARS病毒N蛋白伤寒杆菌菌株,Western Blot检测N蛋白的表达。以该菌株经不同途径(腹腔注射、鼻腔吸附、尾静脉注射、灌胃四种途径)免疫小鼠,初次免疫后14天加强免疫一次,28天后收获小鼠,ELISA检测小鼠血清中针对SARS病毒N蛋白特异性抗体,LDH法及肿瘤形成抑制实验检测小鼠体内针对SARS病毒N蛋白的特异性细胞免疫。结果成功构建稳定表达SARS病毒N蛋白的减毒伤寒杆菌菌株, Western Blot检测到SARS病毒N蛋白的表达,以该菌株免疫小鼠后,在小鼠血清中检测到高效价的针对SARS病毒N蛋白的特异性抗体,LDH法及肿瘤形成抑制实验表明小鼠体内出现了针对SARS病毒N蛋白的特异性细胞免疫。结论构建的重组减毒伤寒杆菌能稳定表达SARS病毒N蛋白,并能刺激实验小鼠产生针对病毒蛋白的特异性体液和细胞免疫,可作为抗SARS病毒和伤寒杆菌的候选二价疫苗。更多还原