抑制素α、βA、βB亚基单克隆抗体制备和肿瘤免疫组化研究

【作者】 夏辉明； 高晓东； 张东升； 王宏卫； 黄新； 张义国； 宫亚欧； 鲁桂琛； 孙颖；

【机构】 郑州大学医学院病理生理教研室； 中国医学科学院药物研究所；

【摘要】 <正>目的:制备抗人抑制素(inhibin,INH)α、βA、βB亚基单克隆抗体(McAb),并进行肿瘤免疫组化研究。方法:抗原为猪卵泡液INH提取物及人工合成的INH亚基多肽段,包括INHα(1-26)(37-65),β A(1-28)(82-114),βB(1-28)(85-115)共6个肽段。以上述抗原免疫BALB／c小鼠,经细胞融合,筛选及克隆化,获得杂交瘤细胞14株。对其免疫学特性进行了分析鉴定,包括:①交叉反应,②抗竞争结合试验,③抗原位点测定,④亲和力测定,⑤效价测定,⑥Ig亚类鉴定⑦染色体记数,⑧免疫组化鉴定。结果:获得分泌抗INHα亚基的McAb细胞6株,分泌抗INH βA亚基的McAb细胞4株, 分泌抗INHβB的McAb细胞4株。抗体效价在1×10-4-1×10-6之间。INHα、βA、βB McABs经 protein A sepharose CL 4B层析柱纯化后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为一条带。分别以INHα、βA、βB的纯化McABs为第一抗体,进行免疫组化研究,发现正常卵巢(5例)颗粒细胞、泡漠细胞、黄体呈阳性染色;正常睾丸(4例)支持细胞、间质细胞、精原细胞、精母细胞呈阳性染色。正常乳腺(2例) 细胞染色阴性。共进行肿瘤免疫组化研究95例,每例均以3种(INH α、βA、βB)McABs为第一坑体,共进行285例次。免疫组化发现卵巢颗粒细胞瘤(10／10,100％)、卵巢粘液囊性癌(6／8)、卵巢浆液囊性癌(3／7)、睾丸精原细胞瘤(3／3)、睾丸精母细胞瘤(2／2)、肾上腺皮质瘤(1／1),恶性葡萄胎(1／1) 呈阳性反应,卵巢无性细胞瘤、卵巢泡漠细胞瘤、食道癌、前列腺癌为阴性反应。以上结果与国外文献报告相似。还发现乳腺癌(29／40,72．5％)、胃癌(3／11)、脑星状胶质细胞瘤(1／1)呈阳性,为我们首先报导。结论:成功制备了分泌抗INHα、βA、βB亚基的McAb细胞14株,对McAb纯化后, 进行了肿瘤免疫组化研究。更多还原