IGF-I在原核和真核中的高效表达及应用研究

【作者】 徐岩； 曹广力； 贡成良； 薛仁宇；

【机构】 苏州大学生命科学学院；

【摘要】 本研究将600bp rhIGF-I基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),在大肠杆菌中获得了与组氨酸融合的高效表达。rhIGF-I是天然hIGF-I基因表达水平的400倍,产物占菌体总蛋白的30％以上,Western blot显示在23kDa附近有一条特异条带。将rhIGF-I基因克隆进pBacPAK-8,获得了杆状病毒转移载体pBacPAK-8-IGF-I,在脂质体的介导下,与线性化的家蚕杆状病毒 Bm-BacPAK6共转染家蚕培养细胞Bm-N,经空斑筛选,PCR检测,获得了重组病毒 Bm-BacPAK-IGF-I。SDS-PAGE检测表明,在感染重组病毒后,家蚕幼虫、蛹的血淋巴中可以检测到一条分子量约为23kDa的特异性条带。ELISA检测显示,随着时间的延长,表达量逐渐增加。更多还原