血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白的克隆、表达及鉴定

【作者】 陈静； 陈枢青；

【机构】 浙江大学药学院生物制药研究室；

【摘要】 目的在毕赤酵母中高效分泌表达血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白并鉴定其活性。方法用PCR 方法克隆人血清白蛋基因,将其C端与PTH(1-34)基因的N端相接,构建重组表达质粒pPIC9- HSA-PTH(1-34)。线性化表达载体转化毕赤酵母宿主菌GS115,对阳性转化子进行PCR鉴定和Mut表型鉴定并用甲醇诱导表达。采用经典的腺苷酸环化酶刺激活性检测法确定HSA-PTH(1-34)的生物学活性。结果重组毕赤酵母分泌HSA-PTH(1-34)的表达量可达400mg/L,分子量与理论值相似,约为70kDa。免疫印迹显示目标蛋白可与抗HSA多抗、抗PTH(1-34)多抗有良好的特异性杂交反应。体外活性实验证明HSA-PTH(1-34)能够激活兔肾皮质细胞中的腺苷酸环化酶,但活性低于PTH(1-34)标准品。结论成功表达出具有生物学活性的血清白蛋白与PTH(1-34)融合蛋白HSA-PTH(1-34),为进一步研究应用打下基础。更多还原