建立稳定表达乙型肝炎病毒含前S2的表面抗原重组细胞系

【作者】 王莉； 吴志峰； 熊仕秋； 黎毓光； 谢杏仪； 吕世华； 胡淑芬； 林晓晖； 卢绍佳； 姚春松；

【机构】 广东省广州市番禺区人民医院； 中山大学医学院；

【摘要】 目的:建立稳定表达含有pre-S2的HBsAg的细胞系。方法:构建在真核细胞表达pre-S2-HBsAg的重组质粒PCI- HBs2。用此质粒转染HepG2细胞,经克隆化培养以及G418筛选, 建立稳定表达HBsAg的细胞系。对其分泌动态、细胞纯度、遗传稳定性等生物学特性做了鉴定。同时对该细胞实验室大量培养的条件进行了优化。结果:成功构建表达pre-S2-HBsAg的重组质粒。转染细胞后筛选到一个稳定表达pre-S2-HBsAg的细胞系 3E3。ELISA检测表明该细胞系分泌的HBsAg水平高,生物学性状研究结果表明稳定表达HBsAg的3E3细胞纯度好,遗传性状稳定。在培养瓶中最佳分泌条件为:200ml培养瓶中细胞生长成单层后维持液20m1．2％NBS DMEM培养基,每三天收集1次。结论:成功建立了稳定表达pre-S2-HBsAg的细胞系。该细胞系遗传性质稳定,表达蛋白产量高。此细胞系可用于pre-S2-HBsAg的制备及纯化。更多还原