错配杂交化学发光法定量检测p16基因过甲基化

【作者】 姚群峰； 宁勇； 郝巧玲； 张利平； 周宜开；

【机构】 湖北中医学院医学检验与技术系； 华中科技大学同济医学院环医所；

【摘要】 目的建立一种基于错配杂交-化学发光检测的p16基因启动子区过甲基化的定量分析方法。方法用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,所有未甲基化的胞嘧啶都被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不发生变化。设计合成1对不含CpG位点的引物,同时扩增甲基化或非甲基化目的DNA片段,用2条分别与甲基化及非甲基化CpG位点互补的寡核苷酸探针与扩增产物进行杂交及化学发光检测,通过探针杂交信号强度比确定样品DNA中甲基化的p16基因的比例。结果本方法具有较好的精密度(CV=5.2%～6.4%)和灵敏度(2.5×10-4pmol),检测已知混合样品的p16基因甲基化百分率与实际结果完全一致。结论我们建立的方法是一种检测快速、操作简便的p16基因甲基化的定量检测方法。更多还原