【作者】 李明； 严阿勇； 姚慧； 王宇； 安晓荣； 陈永福； 苟克勉；

【机构】 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室；

【摘要】 <正>在掌握小鼠ICSI技术的基础上,本文进行了ICSI技术生产转基因小鼠的研究。来自成年KM小鼠附睾尾的精子,使用未加抗冻剂的HEPES-CZB溶液,在液氮中冻融1次后,用于本实验。解冻精子与DNA混匀1 min后,精子头被显微注射到B6D2 F1小鼠卵母细胞质中。精子头与pEGFP-N1环状 DNA共注射生产的ICSI受精卵,在CZB溶液中培养至囊胚期时,39．1％(9／23)的囊胚表达GFP基因。精子注射后6 h,直接移植ICSI受精卵后,7只妊娠受体一共产仔30只,效率为23．8％(30／ 126)。Southern blot分析其中16只后代发现,3只(18．8％)转基因小鼠同时整合了GFP和Neomycin 基因,它们全部来自精子和线性DNA混合的实验组(阳性效率为33．3％,3／9),相反,精子与环状质粒 DNA共注射生产的7只ICSI后代中,没有检测到外源基因。本文结果说明,利用ICSI技术可以高效地生产转基因小鼠,宿主基因组更容易整合线性化的外源基因。更多还原