奶牛乳腺炎的基因治疗研究

【作者】 孙怀昌；

【机构】 扬州大学兽医学院；

【摘要】 奶牛乳腺炎是发生最普遍、防治最难和花费最多的奶牛疾病之一,国内外尚无理想的防治方法。本研究将溶菌酶的广谱溶菌作用与基因治疗原理相结合,用表达溶菌酶基因的乳腺特异表达载体注射乳腺炎患牛乳腺,利用乳腺细胞自主表达的重组溶菌酶治疗奶牛乳腺炎。乳腺注射暂态表达试验结果表明,分泌在牛乳中的重组溶菌酶高达3.7μg/mL,表达时间为20d左右。体外抑菌试验结果显示,重组溶菌酶对大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌等奶牛乳腺炎主要致病菌具有明显的抑制作用。初步临床试验结果表明,两次注射重组载体对隐性乳腺炎的治疗有效率为90%左右,对抗菌素治疗无效临床型乳腺炎的治疗有效率和治愈率分别为85%和30%左右,具体表现为乳腺炎症状消失或有明显改善,乳汁体细胞、大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌转阴或数量明显下降,产奶量明显回升。基因治疗牛乳的PCR检测结果显示,重组载体在牛乳中的残留时间小于2天。牛乳发酵试验证明,表达在牛乳中的溶菌酶对乳酸菌发酵及酸奶生产无明显影响。实验动物饲喂试验结果显示,重组载体在小鼠胃内1 min即完全降解。这些试验结果表明,用表达人溶菌酶基因的乳腺特异表达载体治疗奶牛乳腺炎具有安全、有效和无有害残留等优点,可以替代抗菌素使用和用于“无抗奶”的生产,研究成果已获得发明专利(专利号:ZL02148545.3)。更多还原