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大肠杆菌O157:H7中编码vt2基因的噬菌体的分离与鉴定
【机构】 上海交通大学农业与生物学院；
【摘要】 根据GenBank中VT1、VT2毒素的基因序列设计合成2对引物,以大肠杆菌O157:H7菌株DNA为模板,扩增vt1、vt2,诱导只扩增出vt2的菌株释放噬菌体,利用多种指示菌经双层琼脂平板法来分离纯化VT2噬菌体,观察噬菌斑的特征,提纯病毒粒子进行电镜观察,并对噬菌体中,vt2基因检测、克隆和序列分析。结果显示VT2噬菌体感染MC1061在双层琼脂平板上形成的噬菌斑小而混浊,多呈磨玻璃样;而首次感染大肠杆菌CC118（λpir）,此后用MC1061分离的噬菌体,再以MC1061为指示菌,在双层琼脂平板上形成小而清晰透明的噬菌斑。电镜下噬菌体头部呈六边形外廓,尾部细长无尾鞘结构。以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,检测到vt2特异性DNA带,克隆的vt2基因序列与GenBank中编码VT2毒素的核苷酸序列（X07865,NC002655,BA000007,AF291819）的同源性分别达到99%,确定编码VT2毒素的基因位于噬菌体上,并获得VT2噬菌体φ020324。
【关键词】 大肠杆菌O157:H7；
VT2噬菌体；
形态特征；
vt2基因；
序列分析；
【基金】 上海市农委重点攻关项目,项目编号:沪农科攻字(2004)第11-4号
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会
- 【会议时间】2005-05
- 【会议地点】中国济南
- 【分类号】S852.61
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会