用大肠杆菌表达猪瘟病毒E2主要抗原区检测猪瘟抗体的ELISA方法的建立及初步应用

【作者】 蒋智勇； 樊福好； 宋长绪； 黄忠； 刘燕玲； 张春红； 王浩文； 蔡汝健；

【机构】 广东省农科院兽医研究所； 广东省农业厅；

【摘要】 根据猪瘟病毒株广东流行株序列,设计一对引物,并以包含E2全基因组的重组质粒pMD-E2为模板,扩增出含E2基因的主要抗原区域(360 bp),回收PCR产物,将其克隆入pET-Trx的BamH Ⅰ和NheⅠ位点间,构建原核表达质粒pET-E2,阳性重组质粒转化E.coil BL 21(DE3)plyS,进行原核表达。表达蛋白质有少部分是以可溶形式存在,利用镍离子金属整合亲合层析法对可溶部分进行纯化。结果获得了纯度达90%以上的表达产物。以纯化的猪瘟病毒E2多肽为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗猪IgG为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为:0.8-1.6ug/ml纯化的E.coli表达的E2重组蛋白包被酶标板,用5%的小牛血清进行封闭,血清100倍稀释。试验表明应用重组E2蛋白作为诊断HCV抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。更多还原