脂蛋白脂酶基因复合突变(G177C/G979A)的体外表达

【作者】 于学慧； 赵铁强； 王立； 刘兆平； 张成梅； 陈融； 李丽； 刘国庆； 胡维诚；

【机构】 山东大学医学院病理生理教研室新药评价中心； 北京大学心血管研究所； 山东大学新药评价中心； 山东大学医学院病理生理教研室；

【摘要】 <正> 一例家族性脂蛋白脂酶缺乏症患者,DNA 分析检测出起始密码子突变(G177C/Metl→Ile,脂蛋白脂酶1)和第6外显子突变(G979M Glu242→Lys,脂蛋白脂酶242),同时构建3个表达载体,第1个载体带有脂蛋白脂酶1突变,设计2条引物:上游引物带有该突变,下游引物包含终止子,以脂蛋白脂酶全长cDNA 克隆为模板,通过PCR 定点诱变方法,扩增目的片段。第2个载体带有脂蛋白脂酶242,设计3条引物:中间引物(带有突变)和两侧的上、下游引物。先以中间引物和下游引物一起扩增带有突变位点的片段,再以此PCR 产物片段更多还原