人自身抗原Jo-1的基因克隆和原核表达

【作者】 杨湘越； 兰小鹏； 廖剑； 钟智强； 朱忠勇；

【机构】 南京军区福州总医院全军医学检验中心；

【摘要】 目的克隆并表达人自身抗原Jo-1。方法应用RT-PCR技术,从HL-60细胞株中克隆人自身抗原Jo-1全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T 载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆签定后在IPTG诱导下表达,产物行SDS-PAGE和Western blot。结果PCR产物约为1.5kb,与预期1526 bp接近,测序结果与Genebank报道的完全一致。pGEX-5T-Jo-1重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白分子量为80KD,具有天然人自身抗原Jo-1的免疫原性。结论成功克隆表达人自身抗原Jo-1,为下一步工作奠定了基础。更多还原