成人肝脏组织胞浆蛋白单克隆抗体库的初步建立和鉴定

【作者】 杨金菊； 宁云山； 何湘； 吴琼； 宋颖博； 李辉； 任飞垚； 周枫； 李戬； 柳晓兰； 陈勇； 蔡云； 钱小红； 贺福初； 李明； 高建恩； 孙启鸿；

【机构】 北京蛋白组研究中心抗体工程研究室； 南方医科大学热带医学研究所； 军事医学科学院放射医学研究所免疫学研究室； 军事医学科学院放射医学研究所基因组学和蛋白质组学实验室；

【摘要】 <正> 目的:在蛋白质组学研究中,单克隆抗体及其相关技术在蛋白质分子的定性、定量、定位和蛋白翻译后修饰及蛋白-蛋白相互作用的研究中具有不可替代的作用。本研究以成人肝脏细胞胞浆蛋白为研究对象,初步建立了抗成人肝脏组织细胞胞浆蛋白的单克隆抗体库,以适应肝脏蛋白质组学研究对抗体的需要。方法:成人肝脏组织匀浆后离心(5,000rpm,10min),收集上清,即为细胞浆组分。对上述细胞浆组分用离子交换及分子筛层析进一步组份化,共获得16个相应的肝脏组织细胞胞浆蛋白质组分。应用上述蛋白质组分为复合免疫原,免疫小鼠,建立识别未知的、天然人肝脏组织细胞胞浆蛋白的单克隆抗体库。所获得的抗体经类别和亚类、免疫印迹、免疫组化鉴定后,进一步采用已知纯化抗原对未知抗体的ELISA筛选方法、已知抗原对未知抗体的Western blotting筛选方法、肝脏λ噬菌体cDNA表达文库和T7噬菌体展示cDNA文库筛选方法、免疫共沉淀结合质谱方法来鉴定抗体识别蛋白。更多还原