血清双向电泳样品制备技术的优化及应用

【作者】 赵亮； 丁彦青；

【机构】 南方医科大学病理学教研室；

【摘要】 <正> 目的:优化血清双向电泳的蛋白质样品制备方法,建立稳定且分辨率高的血清蛋白的2-DE图谱,为识别鉴定疾病相关蛋白质奠定基础。方法:筛选5例大肠癌血清标本,按等质量混合,分别利用直接溶解和热SDS法处理血清样品,应用固相pH梯度双向凝胶电泳分离血清的总蛋白质,凝胶经银染显色后,用Melanie 4软件分析双向电泳图谱。结果:应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱。两种方法所得蛋白质点数分别平均为702±49和675±46。对热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,3块凝胶的平均蛋白质点数为695±59,平均匹配点数为623±52,匹配率达89.6%,且3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向的偏差为(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(0.97±0.12)mm。结论:热SDS法是一种更好的血清蛋白质样品制备方法,利用热SDS法处理血清样品可以明显改善2-DE电泳图谱效果,并得到更多的蛋白质点。我们在此基础上建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱,为肿瘤血清蛋白质组学分析奠定了基础。更多还原