针对PLK1基因mRNA的SiRNA治疗结肠癌的细胞学研究

【作者】 丁佳逸；

【机构】 浙江大学第二附属医院肿瘤研究所；

【摘要】 目的:PLK1(Polo-like kinase 1)是影响肿瘤细胞增殖的细胞周期基因,抑制该基因表达,可以控制相应细胞的生长,在肿瘤的发生发展中意义重大,利用化学合成PLK1(Polo-like kinase 1)基因相应的小干扰RNA(SiRNA),探讨SiRNA 对肿瘤细胞中PLK1基因表达的敲除,相应细胞生物学特征改变,以及这种作用的机理。方法:设计合成对应于PLK1 基因表达mRNA 的10种特异SiRNA,转染大肠癌细胞株SW480,逆转录cDNA 实时定量PCR 检测PLK1 基因表达,筛选SiRNA 以及它们的混合物进行浓度梯度试验,然后以最佳作用SiRNA 分别对SW480、肝癌细胞株SMMC-7721和乳腺癌细胞株Bcap-37进行处理,分析生物学特征变化,并进一步的分析了SiRNA 的广泛生物学意义。结果:10种50nM 的SiRNA均敲除了PLK1基因的表达,其中P1、P4和P9三组敲除mRNA 达80%以上,浓度效应曲线表明,这三种SiRNA 及其混合物在25nM 处理72小时达到最佳作用效果,其中三种SiRNA混合物在PLK1基因表达敲除、抑制细胞生长、凋亡、细胞周期改变等方面,具有明显的作用,在多种肿瘤细胞中表现了敲除PLK1基因表达的作用。结论化学合成相应PLK1基因的特异SiRNA,对SW480 细胞中该基因表达具有抑制作用,其中三种作用明显,而且这三种SiRNA混合物作用效果更好,它们通过抑制PLK1基因的表达、改变细胞周期、诱导凋亡的途径,明显的抑制了大肠癌细胞株SW480、肝癌细胞株SMMC一7721和乳腺癌细胞株Bcap-37的生长,PLK1基因表达的SiRNA 敲除在多种肿瘤细胞中得到体现,提示了抗肿瘤的新思路。更多还原