结核杆菌基因疫苗构建物对小鼠的免疫效应

【作者】 窦骏； 陈峻崧； 陈国兵； 赵枫姝； 褚莉莉； 唐权； 房雪锋； 潘猛；

【机构】 东南大学基础医学院病原生物学和免疫学系；

【摘要】 <正> 目的:设计与构建结核杆菌Ag85A和细胞因子GM-CSF基因疫苗构建物,研究其在小鼠体内的免疫效应。方法:从结核杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出结核杆菌Ag85A基因序列并插入到质粒pIRES上成为pI85A,用PCR方法从pc-GM-CSF质粒中扩增出GM-CSF,构建于pI85A质粒上,形成基因疫苗构建物pI85AGM,然后将其转染7721细胞(人肝癌细胞),进行蛋白的表达和鉴定。分别给C57BL/6小鼠接种pI85AGM或pI85A或pIGM或空质粒,100μg/鼠(三次总共300μg/鼠,每两次接种间隔三周)。通过CTL和NK细胞杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖试验,以及小鼠血清抗体的检测,考察结核杆菌Ag85A基因疫苗构建物pI85AGM对小鼠的免疫效应。结果:经酶切鉴定和DNA测序证实更多还原