缺血预处理对急性冬眠心肌核因子-κB及细胞凋亡的影响

【作者】 夏勇； 林利； 李东野；

【机构】 徐州医学院附属医院心内科；

【摘要】 目的使用闭胸法建立冬眠心肌的动物模型。观察冬眠心肌的病理及超微结构的改变,并以其超微结构改变作为标准:(1)探讨冬眠心肌组织中细胞凋亡的发生情况。(2)探讨冬眠心肌中NF-κB、Bcl-2、Bax的变化和意义。(3)探讨缺血预处理对NF-κB、Bcl-2、Bax表达的影响及其对心肌细胞凋亡的影响。方法(1)18只小型中国家猪,随机分为三组:对照组(CON,n=6);冬眠心肌组(HM组,n=6);缺血预处理组(IP组,n=6)于模型制备前应用球囊法行两个循环各5min的缺血/再灌注处理;HM组和IP组以左冠状动脉前降支为靶血管,经股动脉送入球囊造成冠状动脉即刻狭窄80%-90%后持续120分钟,制备成冬眠心肌模型;CON组以相同方法行冠状动脉造影术但无狭窄。(2)处死动物后分别取正常心肌、冬眠心肌两种心肌标本进行光镜、电镜检查以观察大体形态及超微结构。(3)采用免疫印迹(Western blot)方法测定三组心肌组织中NF-κB、Bcl-2、Bax含量的变化。(4)采用免疫组化方法检测三组心肌组织中NF-κB、Bcl-2、Bax表达情况。(5)TUNEL检测冬眼心肌组织中细胞凋亡。结果(1)病理结果冬眠心肌心内膜至心外膜全层未见心肌细胞坏死的病理改变,仅有细胞肿胀、核肿胀等非特异性改变,IP组与HM组相比心肌细胞水肿及核水肿等改变有所减轻。(2)电镜结果冬眠心肌表现为肌丝稀疏,糖原聚集,线粒体小而密,核周空泡大,肌浆网扩张。(3)NF-κB、Bcl-2、Bax的变化:冬眠心肌组中NF-κB、Bcl-2、Bax显著升高,缺血预处理后NF-κB显著下降,但仍高于CON;而Bcl-2在缺血预处理后进一步升高,Bax在缺血预处理后无明显改变。(4)免疫组化结果冬眠心肌组中NF-κB、Bcl-2、Bax表达的阳性率高于CON组,在IP组的冬眠心肌中,NF-κB表达的阳性率下降,Bcl-2却进一步升高,Bax表达的阳性率在IP组与HM组相比无明显差别。(5)TUNEL结果CON组中细胞凋亡极少,HM组中细胞凋亡较多,IP组中细胞凋亡明显减少但仍高于CON组。结论(1)冬眠心肌中存在心肌细胞凋亡,Bcl-2对冬眠心肌细胞凋亡有重要的调控作用,缺血预处理后Bcl-2表达增多有利于心肌细胞存活;(2)缺血诱导的冬眠心肌细胞凋亡可能与NF-κB激活及其启动相关基因有关;(3)缺血预处理可能通过适度抑制NF-κB来减少心肌细胞凋亡的发生。更多还原