镰形扇头蜱唾液腺cDNA文库的构建

【作者】 张维谊； 周金林； 龚海燕； 周勇志； 黄维义； 沈杰；

【机构】 中国农科院上海家畜寄生虫病研究所； 广西大学动物科技学院；

【摘要】 本实验构建了镰形扇头蜱唾液腺cDNA 表达文库。用Trizoi 试剂提取镰形扇头蜱唾液腺总RNA,经反转录合成cDNA 第一链,应用LD-PCR扩增方法,合成双链cDNA.用Sfi I 内切酶修饰此双链cDNA,使形成两端分别带有Sfi I A 和Sfi I B 的粘末端。经CHROMA SPIN-400柱纯化。收集400bP 以上的双链cDNA 片段,将其连接于带有Sfi I A 和Sfi I B 末端的λTriplEx2噬茵体载体。经体外包装后以XL-Blue为受体茵构建cDNA 表达文库。经测定,库容量为7.08×10~5,重组率为95.2%。扩增后的文库滴度为1.45×10~9pfu/ml。随机挑取20个克隆转化到质粒pTriplEx2,经抽质粒、测序得到两个细胞色素氧化酶全长基因。更多还原