日本血吸虫保护性单抗SSj14噬菌体模拟抗原表位研究

【作者】 王欣之； 傅志强； 刘金明； 黄劭鹏； 石耀军； 林矫矫； 蔡幼民；

【机构】 中国农科院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心；

【摘要】 SSjl4单抗为本实验室研制的一株在体内和体外时日本血吸虫攻击感染都有免疫保护作用的单克隆抗体。本试验用日本血吸虫保护性单抗SSjl4亲和筛选噬菌体随机12肽库.结果经三轮筛选,特异性克隆得到有效的富集,产出率为第一轮的250倍;随机挑职30个克隆测序,其中9个为带有QTIARHHLRPTV 序列的相同克隆(记为M1),12个为带有序列AWTPWHVHKPSG 的相同克隆记为M2),另有9个单个序列,其序列分别为TMSNPITSLISV,NFMESLPRLGIdH,TSKJLTDLFSYA,EAVNRWLPVREL,KHYDPFHHRMPQ,AHRHPISFLSTL,HIKHVIPRSNLS,HNNSLPFFKLAT,YQSQSFSTSFD,依次记为M3—M11;用直接ELISA 法检测11种不同克隆与ssj14单抗特异结合的能力,结果显示M1和M2与ssj14单抗结合特异性明显高于其它克隆.竞争ELISA 试验中,M1和M2和第三轮筛选后获得的混合噬茵体对SEA 与ssj14结合的抑制率分别为36.11%,49.63%和67.09%。用噬茵体M1,M2,和混合噬菌体结合FCA/FIA 免疫小鼠,结果和对照组相比,M1,M2以及混合噬菌体免疫小鼠的减虫率分别为13.84%,22.69%,52.83%;肝脏EPG 减少率分别为34.17%,48.56%,65.47%;粪便EPG 减少率分别为28.89%,44.89%,73.78%.本研究表明,利用噬菌体展示技术可以获得具有免疫活性的ssj14单抗的模拟抗原表位,这些短肽分子能诱导一定程度的保护性免疫。更多还原