土耳其斯坦东毕吸虫成虫cDNA文库的构建

【作者】 王春仁； 邢继兰； 何国声； 仇建华； 刘文韬； 于万才； 许腊梅；

【机构】 黑龙江省兽医科学研究所； 中国农科院上海家畜寄生虫病研究所；

【摘要】 按照SMARTcDNA 文库构建试剂盒说明,以TRIZOL 试剂提取的土耳其斯坦东毕吸虫成虫总RNA 为模板,以含Sfi I B 酶切位点的oligo（dT）为引物反转录合成第一链cDNA,利用含Sfi I A 酶切位点的SMART 核苷酸作为cDNA 第一链在mRNA 5’端延伸出去的模板,采用LD-PCR 技术以改良的oligo（dT）引物合成双链cDNA,经蛋白酶K 和Sfi I消化后,过CHROMA SPIN-400柱进行分级分离。双链cDNA 与载体入TripEx2两臂连接,体外包装后构建成土耳其斯坦东毕吸虫成虫的cDNA 噬菌体表达文库。经测定文库容量为6.38×10⁶,文库扩增后的滴度为3.48×10¹⁰（Pfu/ml）,PCR 测定的重组率为92%。各项指标表明,我们成功的构建了高质量的cDNA 文库,为进一步筛选、克隆保护性抗原基因奠定了基础。更多还原