禽流感病毒ELISA检测方法的建立及诊断试剂盒的研制与应用

【作者】 肖运才； 李自力； 胡思顺； 石德时； 许青荣； 程峰； 刘梅； 毕丁仁； 王桂枝；

【机构】 华中农业大学动物医学院；

【摘要】 本研究以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(1-19N2亚型)提纯物为免疫原,获得了鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16。以纯化的鸡抗AIV IgG为包被抗体,兔抗AIV IgG.为第二抗体,建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗AIV IgG的最佳包被浓度为1 μg/ml,兔抗AIV IgG的最适工作浓度为5 μg/ml;对已知的阳性样品,用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上,且能检出其它亚型的禽流感病毒;与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应,说明本方法有很高的特异性及敏感性。将该方法先后制备了8个批次的诊断试剂盒,于湖北、安徽及河南等地的养禽场、兽医站、农科院、农业院校等化验室应用,取得了良好的效果。更多还原