肿瘤耐药新基因sorcin及其机制研究

【作者】 周圆； 谭耀红； 许元富； 李光耀； 齐静； 肖瑛； 杨纯正；

【机构】 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室；

【摘要】 目的:在用cDNA Microarray分析白血病多药耐药细胞K562/A02时,发现有12个基因在两株细胞中的表达有明显差异,其中一个就是sorcin。Sorcin最初是在耐药细胞株中发现的,但它与肿瘤耐药的关系一直未得到肯定,因此我们深入研究了sorcin基因与白血病多药耐药的相关性,并初步分析了其耐药机制。方法:用Northern Blot和Western Blot分别检测K562和K562/A02细胞中sorcin基因和蛋白水平表达的差异。用RT—PCR方法对sorcin基因在白血病患者和健康人中的表达水平进行检测。利用反义寡核苷酸和RNA干扰技术验证了抑制sorcin基因后细胞耐药表型的变化。将从K562/A02细胞中克隆得到的sorcin基因转染K562敏感细胞,观察稳定转染后细胞对阿霉素及其它多药耐药类药物的敏感性。用荧光钙指示剂fura-2/AM测定敏感与耐药细胞内以及sorcin转染后细胞内的游离钙浓度。结果:Northern Blot和Western blot结果均显示与敏感细胞相比,sorcin在K562/A02细胞中有明显扩增。临床资料分析表明,白血病患者sorcin基因表达明显高于正常人,急性白血病患者复发难治组高于初诊组和完全缓解组,临床耐药组显著高于非临床耐药组。反义寡核苷酸转染K562/A02细胞后,细胞内sorcin蛋白的表达被抑制,细胞内蓄积的阿霉素浓度升高了44%,对阿霉素的敏感性提高了18.27%。两段针对sorcin基因的siRNA分别转染K562/A02细胞72小时后,细胞中sorcin mRNA分别降低了34.46%和65.8%,对阿霉索的IC50,由113.26ug/ml降为76.76 ug/ml和69.32ug/ml。Sorcin基因转染,K562细胞后,细胞中sorcin表达水平明显高于未转染和转染空载体的K562细胞,在经G418筛选得到的两株sorcin稳定表达的细胞中,K562/E8A6和K562/G7D4对阿霉素的耐药倍数分别为4.85和3.67倍;对VP-16的耐药倍数分别为2.19和1.46倍;对高三尖衫酯碱的耐药倍数分别为10.5和1.7倍。用F340/F380表示细胞内游离钙浓度的高低,在K562、K562/A02以及sorcin转染的K562细胞中,其F340/F380分别为2.07±0.26、0.94±0.1、1.457±0.11。结论:sorcin基因不但在K562/A02细胞中稳定高表达,而且其过度表达与白血病患者临床耐药密切相关。抑制sorcin基因具有一定的耐药逆转作用。sorcin基因的转染能够增加细胞的耐药表型。耐药细胞内的游离钙水平要低于敏感细胞,sorcin基因转染敏感细胞后也会降低游离钙水平。我们分析,sorcin与Ca2+的结合不但会改变信号传导,而且通过细胞内游离钙水平的改变影响其它耐药蛋白的活性,这些改变都可能会影响细胞的多药耐药。我们认为作为一种肿瘤耐药相关基因,sorcin参与了白血病耐药表型的形成,可作为白血病耐药诊断和治疗的新靶点。更多还原