地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达及其微量热分析

【作者】 李美菊； 陈向东； 刘义； 刘国生； 徐婧； 沈萍；

【机构】 武汉大学生命科学学院； 武汉大学化学与分子科学学院；

【摘要】 <正> 本文利用PCR的方法克隆得到地衣芽孢杆菌C6的碱姓蛋白酶基因106-1(全基因)及其缺失不同调控区域的DNA片段106-2(缺失该基因的上游调控区)、106-3(缺失该基因的上游调控区)、106-4(缺失该基因的上、下游调控区),得到不同的重组质粒,并转入大肠杆菌HB101,获得不同的重组菌株A(宿主菌株HB101)、B(pBE2空质粒载体)、C(106-1)、D(106-2)、E(106-3)、F(106-4)。同时,将106-4片段进行亚克隆,在大肠杆菌的表达系统BL21(DE3)/pET26b中进行表达,利用SDS-PAGE等方法均可检测到目的片段的表达,而重组菌株C、D、E、F中均未检测到。鉴于微量量热技术的高灵敏,快速等一系列的优点,我们用此方法对构建的一系列的重组菌株进行了检测。分析结果表明,重组菌株A、更多还原