稳定高表达anti-p185嵌合抗体的细胞株的筛选和鉴定

【作者】 刘奕； 董艳秋； 刘兢；

【机构】 中国科学技术大学生命科学学院；

【摘要】 目的和意义:哺乳动物细胞表达系统是生产治疗性抗体的主要表达系统之一,而细胞表达稳定性是工业生产中评价细胞株的一个重要指标,但是目前对于如何进行细胞稳定性的检测还没有很明确统一的说法。本实验室采用GS-CHO系统通过逐轮加压初步筛选出了几株高表达抗乳腺癌基因Her-2的嵌合抗体的细胞株,本文通过对这些高表达细胞株的系统研究,提出了一套在较短时间内完成细胞株的传代稳定性测定的方法,并通过此法筛选出稳定高表达的细胞株用于大规模的细胞培养。方法:选择三株高表达细胞株Nu3、Oa5—4和Oa4—3,分别在高选择性压力、低压力、无压力和降血清等五种不同压力和血清条件下,在100ml细胞培养瓶中对它们进行连续传代培养,在指数生长期末期消化细胞进行计数,通过设计的公式计算单位细胞(10~6个)每天的平均表达量Qp’,作图比较前后不同代次的Qp’值,即可检测出其稳定性。之后再通过ELISA法测定细胞的绝对表达量和结合活性,SDS-PAGE和Western法测定表达抗体的正确性,以及MTT法测定其体外抑制活性,以此验证筛选的高表达细胞株表达抗体的有效性。结果:在比通常方法缩短约1/3的时间内即可看出细胞稳定性的基本趋势,其中Oa4-3细胞株表达量最高,并且具有很好的降血清和撤压稳定性。以此细胞株为基础又进行了亚克隆和稳定性检测,结果筛选出了更高表达量的细胞株,证实了前面方法筛选到的细胞株确实是一株能稳定高水平表达嵌合抗体的细胞株。现已进入了大规模培养的试验,初步结果也肯定了以上结论。结论:采用指数期细胞计数法进行稳定性检测缩短了细胞传代的时间间隔,是一种高效、简便而准确的方法。由此筛选出的高表达优势细胞株Oa4-3可用于进一步的大规模生产。更多还原