小鼠新基因P55启动子的克隆与分析

【作者】 丁乃峥； 何梅； 胡劲松； 何成强； 陈建国；

【机构】 北京大学生命科学学院细胞生物学实验室；

【摘要】 新基因D10Wsu52e编码一个从线虫到人类在一级结构上非常保守的蛋白,该蛋白功能尚未确定。在小鼠中,它定位在第十号染色体上,含有12个外显子和11个内含子。在本研究中,我们从小鼠胚胎干细胞中克隆了该基因上游5’侧翼区2.1kb DNA片段,经序列分析发现其含有多个TATA、GATA、YY1和SP1结合位点。通过构建一系列突变体确定了该基因的启动子核心区位于翻译起始位点ATG上游-198～-8位。由于缺失TATA区对该启动子活性没有明显影响,认为其是一个非TATA框型启动子。凝胶阻滞实验结果表明核心区中至少含有一个YY₁和SP₁调节元件。经5’-RACE发现该基因的转录起始位点位于-79位核苷酸处。对小鼠心、肺、肝、脾、肾、脑、睾丸等组织进行Northern blotting,确定了这些组织均表达D10Wsu52 mRNA。进一步将小鼠的该基因启动子转染NIH 3T3（小鼠）、BHK21（仓鼠）、PK15（猪）、COS7（猴）和HeLa（人）等细胞系瞬时表达GFP,在这些细胞系中均能正常启动GFP的表达,表明该启动子在不同种属中核心区域可能非常保守。更多还原