荧光RT-PCR检测活禽和禽产品中新城疫病毒中强毒株的研究

【作者】 张鹤晓； 赖平安； 刘环； 刘继红； 郭晋优； 谷强； 张利峰； 汪琳； 段生涛； 张向东； 孙颖杰； 朱文斯； 杨伟； 黄茜华； 赖少梅； 李宁；

【机构】 北京出入境检验检疫局； 辽宁出入境检验检疫局； 深圳匹基公司； 中国农业大学；

【摘要】 新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种急性、败血性、高度接触性传染病,传播迅速、发病率和死亡率高,有时高达100%,曾给养鸡业造成了不可估量的经济损失。国际兽医局(OIE)将其列为A类传染病,我国也将其列为一类检疫对象。NDV属Ⅰ型副粘病毒,根据毒株致病力的差异,可将NDV分为强毒力型、中等毒力型及弱毒力型。多年来,由于新城疫疫苗的广泛应用,该病曾一度得到很好的控制。但是近年来,特别是1996年以来在免疫鸡群中常常出现非典型新城疫流行,致使养禽业主高度恐慌。我国是一个养禽大国,禽产品主要出口日本、韩国、欧盟等国家,2001年韩国宣称从中国出口的鸭肉中分离出禽流感病毒H5亚型,并停止从我国进口禽肉,日本根据韩国的决定,加强了对我禽产品的检疫,仅去年就多次声称从中国出口的禽肉中分离鉴定出新城疫野毒,对检出问题的禽肉采取销毁处理措施并对我禽产品实施更严厉的批批检疫措施,致使我禽产品出口困难重重。国内的疫情和由此带来的出口受阻,对我国的养禽业来说无疑是雪上加霜。随着中国的入世,中国市场与世界市场融为一体,成为世界市场的一部分,新城疫问题不解决,退一步说活禽和禽产品中新城疫病毒的快速检测技术不解决,禽产品的出口将面临巨大风险。国内外检测咽、喉拭子或禽肉、组织脏器中新城疫病毒常用的方法是鸡胚病毒分离,该方法是OIE推荐的方法,但是耗费时间长,约需3周左右,不适应我国进出口禽肉快速检验,快速通关放行的需要,给进出口企业带来不便,也不适应我国加入WTO后国内消费者对禽肉安全性的需求。普通RT-PCR虽能直接检测病毒,但是敏感性不高,从收集到的资料看,不能直接用于检测禽肉中的新城疫病毒。荧光RT-PCR技术是二十世纪九十年代末才发展起来的新技术,将荧光素标记的探针与引物一起,在荧光PCR仪中反应,电脑对整个反应进行实时监测,避免了交叉污染,大大提高了检测的敏感性。本研究的目的是根据新城疫病毒F基因序列,开发、设计多条引物和探针序列,建立快速检测活禽或禽产品中中强毒力新城疫病毒的荧光PCR检测技术,不仅大大缩短进出口活禽或禽产品的检疫时间,而且对田间新城疫监控和消灭具有重要作用。更多还原