线粒体神经酰胺酶转染K562细胞,通过其下游代谢产物1-磷酸鞘氨醇,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平

【作者】 王福旭； 董作仁； 刘泽林； 潘崚； 罗建民； 张学军； 杨敬慈；

【机构】 河北医科大学第二医院血液科；

【摘要】 <正> 目的最近,克隆了一种新的选择性定位于线粒体的神经酰胺酶(El Bawab S et al.JBC 2000,275:21508-13),提示线粒体存在着神经酰胺代谢途径,可能对线粒体的功能特别是抗凋亡功能产生影响。我们将线粒体神经酰胺酶基因转染到K562细胞,以此了解线粒体神经酰胺酶的细胞生物学效应。方法以脂质体介导将含有线粒体神经酰胺酶cDNA的pCDNA3.1/His-CDase质粒转染到K562细胞,G418筛选阳性克隆,建立稳定表达线粒体神经酰胺酶的K562TC细胞株。MTT法、Annexin V/PI法、FCM及Western印迹分别检测K562与K562TC细胞在细胞毒药物抗性、血清剥夺耐受性及Bcl-2蛋白表达更多还原