壳寡糖通过NF-κB诱导巨噬细胞产生一氧化氮和肿瘤坏死因子-α

【作者】 于志军； 赵鲁杭； 柯海萍；

【机构】 浙江大学医学院生物化学与分子生物学研究所；

【摘要】 <正> 目的探讨壳寡糖体外激活单核/巨噬细胞的分子机制和细胞内信号传导机制。方法壳寡糖刺激RAW264.7细胞,用Werstem blot法检测细胞核内核转录因子-κB(NF-κB)的变化,用Griess还原法观察壳寡糖对巨噬细胞释放NO的作用以及NF-κB抑制剂对壳寡糖诱导巨噬细胞释放NO作用的影响。运用相对定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术和酶联免疫吸附实验(ELISA)技术,检测巨噬细胞TNF-α基因转录水平和翻译水平的变化。结果100μg/ml壳寡糖刺激RAW264.7细胞,4小时后可引起细胞核内NF-κB含量的增加,6小时达到高峰,可持续至少6小时。18个小时便可明显诱导NO(19.6±3.6μmol/L;p<0.01)和TNF-α(64.5±16.5pg/ml;p<0.01)的释放,以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)(22.05±1.90/mgprot;p<0.01)基因的表达;NF-κB抑制剂PDTC可抑制壳寡糖诱导巨噬细胞生成NO和TNF-α。结论壳寡糖刺激RAW264.7细胞,通过NF-κB途径诱导iNOS和TNF-α基因表达,使NO和TNF-α生成增加。这是壳寡糖在体外引起巨噬细胞免疫活性增强的重要细胞内信号传导机制。更多还原