人同源框基因Nkx3.1启动子的克隆及其启动子活性鉴定

【作者】 姜安丽； 张建业； Charles Young； 胡晓燕； 王咏梅； 刘志芳； 贺美兰；

【机构】 山东大学医学院生物化学教研室； 美国Mayo临床泌尿研究所；

【摘要】 <正> Nkx3.1是前列腺特异表达的同源框基因,与前列腺发育及前列腺癌密切相关。为研究它的转录调控,我们采用PCR方法扩增了Nkx3.1基因上游1.06kb片段及其5’-缺失体（861bp,617bp,417bp,238bp）,将其克隆到pGL₃-basic载体中,以pRL-TK作为内对照质粒,共转染前列腺癌细胞LNCaP,同时以pGL₃-basic和pGL₃-control作为阴性、阳性对照。通过双荧光素酶活性检验测定其启动子活性。结果显示:pGL₃-1.06kb共转染LNCaP细胞48 h后,双荧光素酶活性测定M1/M2为2.7,是pGL₃-control相对活性的1.5倍,pGL₃-basic相对活性的50倍。5’-缺失体（pGL₃-861bp,pGL₃-617hp,pGL₃-417bp,pGL₃-238bp）共转染LN-CaP细胞48h后的相对活性分别为0.71,0.84,0.44和2.07。pGL₃-238bp的相对活性为pGL₃-1.06kb活性的80%,表明238bp（+8bp～230bp）片段都具有明显的启动子活性。在238bp片段中含有典型的TATA更多还原