血管平滑肌条在磺脲受体研究中的应用

【作者】 李军； 张乐之； 罗平； 汪海； 肖文彬；

【机构】 第三军医大学药理教研究室； 军事医学科学院毒物药物研究所；

【摘要】 <正> 目的:评价血管平滑肌条在研究磺脲受体结合特性中的应用。方法:对比研究[³H]格列本脲（glibenclamide,Gli）与主动脉平滑肌条和主动脉平滑肌细胞膜在不同实验条件下的特异性结合。结果:在PH7.40的HEPES缓冲液中25℃孵育60min时,3nM[³H]Gli与大鼠主动脉平滑肌细胞膜特异性结合为0.5±0.2fmol/mg蛋白,占总结合的8.8%。改变缓冲物质（Tris和PBS）,改变孵育时间、温度和缓冲液pH,加入1mMATP,或加入50mM NaF和0.1MgATP使膜标本磷酸化,或在无HEPES缓冲液（用1mM EGTA代替5mM CaCl₂）加入1μM苯甲基磷酰氟、1μM抑胃酶肽和1μM苯丁抑制素抑制胰蛋白水解对[₃H]Gli与主动脉平滑肌细胞膜的特异性结合均无明显影响。相比较,在HEPES缓冲液中25℃孵育60min时,3nM[₃H]Gli在pH6.00-8.50范围内,特异性结合为16.8-19.2fmol/mg湿重,占总结合的56-62%,在2～8mg范围内,特异性结合量与主动脉条湿重呈线性关系（r=0.993,P<0.01）。在4～25℃范围内特异性结合随温度增加而增加,但在25～37℃范围内,特异性结合不再随温度增加而改变。[₃H]Gli与主动脉平滑肌条结合反应的平衡时间为60min,其特异性结合的变异系数较与主动脉平滑更多还原