Formazan定量法评价小鼠脑片缺血性损伤及药物的保护作用

【作者】 葛求富； 彭国平； 于丽芬； 余国良； 刘建仁； 魏尔清；

【机构】 浙江大学医学院； 杭州民生药业股份有限公司；

【摘要】 <正> 目的:脑缺血损伤使线粒体酶活性降低,可使脑组织分解2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产生红色产物formazan减少。本研究建立对formazan含量准确快速定量方法,并用于评价小鼠脑片缺血性损伤及药物保护作用。方法:首先,合成、分离和提纯formazan,作为对照品,进行用分光光度法测定formazan量的专属性和线性试验;其次,设计和制备脑片孵育装置,并验证其均一性:然后,小鼠脑片缺氧/缺糖(OGD)和/或用药后,用TTC染色,用10%甲醛固定30～60min,分离皮层和纹状体,分别用二甲亚砜:乙醇(1:1)抽提红色产物formazan,用分光光度法测定490nm处的吸收度,计算不同皮层纹状体产生的formazan量:最后,以formazan量来验证药物edaravone、ONO-1078对脑片的保护作用。结果:实验中,获得了纯度为99.3%的formazan对照品。formazan浓度在50～1000μg/ml更多还原