人抑白血病因子（HLIF）对M₃型白血病骨髓细胞抑制作用的观察

【作者】 闫晓红； 侯金凤； 闫美容； 苏秀兰； 哈森；

【机构】 呼和浩特市内蒙古医学院细胞生物学教研室；

【摘要】 目的:观察人抑白血病因子（HLIF）对M₃型白血病细胞的抑制作用,比较HLIF与4种中药有效成份抑制白血病细胞的协同作用。方法:（1）制备抑白血病因子（HLIF）,取M₃型白血病患者静脉血50ml,离心、冻融、取上清作为诱导液,用诱导液对健康羊进行多部位、多次诱导,于第21天杀死动物,分别取血清,脾脏,提取、离心、超滤,获得小分子活性物质,滤膜除菌,分装,并命名为人抑白血病因子（HLIF）。（2）采用高pH不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统对HLIF的纯度进行鉴定,并采用盐酸水解法处理样品,对HLIF的氨基酸进行分析（日立835-50型氨基酸分析仪）。（3）抑癌率的检测:取急性粒细胞性白血病患者的骨髓细胞5ml,用淋巴细胞分离液分离有核细胞,细胞浓度调至I×10⁶个/ml细胞数,37C°下,96孔板培养24小时,加HLIF100ul/孔,同时分别设龙葵多糖等四种中药有效成分协同作用孔。各设复孔8个,用药剂量为50ul/孔,各自的浓度为:龙葵多糖10mg/ml、黄芪多糖10mg/ml、当归多糖3mg/ml、小蘖胺2mg/ml。24小时后加MTT 10ul/孔（5mg/ml）作用4小时,终止反应,进行抑癌率的检测（MTT法）。（4）电镜观察HLIF、中药龙葵多糖诱导白血病细胞的凋亡。结果:（1）HLIF电泳分离出均一而清晰的1条区带:氨基酸分析HLIF含有14种氨基酸,包括天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和氨,其总含量为8.198mg/ml。结果表明HLIF是一纯度很高的低分子活性因子。（2）HLIF对人急性粒细胞性白血病在体外有明显的抑制作用,抑癌率为56.76%。黄芪多糖,当归多糖,小蘖胺和龙葵四种中药有效成分对人白血病细胞单独作用,有一定的抑制作用（黄芪多糖的抑制率为43.9±3.8470;当归多糖抑制率为49.422±5.1109:小蘖胺的意志率为42.91±3.7861:龙葵多糖的抑制率为46.69±4.612）,当与HLIF协同作用于人白血病细胞时,抑癌率则有明显的增强（HLIF+黄芪多糖的抑制率为57.6±3.9099;HLIF+当归多糖抑制率为73.76±5.7737:HLIF+小蘖胺,抑制率为67.89±5.7616;HLIF+龙葵多糖,抑制率为58.81±4.9195:P<0.05）。（3）HLIF与龙葵多糖对体外培养的人白血病骨髓细胞有明显的诱导凋亡作用。电镜下可观察到凋亡细胞,可见细胞核膜起皱,核固缩,染色质成为致密的斑块,形成一个或多个黑色、表面完整光滑的核小体,有的核边集,形成典型的月牙形核,并具有完整的核膜及线粒体膜系统。有时可见线粒体,内质网溶解和扩张现象。讨论:白血病抑制因子（LIF）是一种作用广泛的因子,它可促进白血病细胞分化并抑制其增殖。但对正常骨髓造血干细胞和原始粒细胞影响很小。实验证明用人的白血病细胞诱导大动物而产生的HLIF不仅能抑制小鼠白血病细胞,对体外培养的人白血病骨髓细胞有更强的抑制作用,显示出来自同源的HLIF对人白血病细胞作用的专一性。细胞周期中存在着生理性细胞凋亡,它受细胞内外多种因素的调节,在胚胎发育,组织分化,及个体生长衰老过程起着非常重要作用。细胞凋亡的正常动态平衡被打破,可导致肿瘤及其他疾病的发生。本实验研究中抑白血病因子能诱导人白血病细胞凋亡的发生,说明HLIF诱导肿瘤细胞凋亡可能是在细胞周期的水平上调整恢复失去的动态平衡,通过细胞内各种信号的传递,诱导激活或修饰细胞骨架蛋白及某些蛋白激酶,导致细胞骨架降解,激发自主死亡程序,最终导致细胞死亡,抑制癌细胞的增殖,达到治疗的目的。更多还原