BFGF单克隆抗体的生产、纯化及其在ELISA中的应用

【作者】 向军俭； 徐晓鹏； 杨红宇； 黄峙； 李贵生；

【机构】 暨南大学生命科技学院；

【摘要】 目的:从已建株的抗碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单克隆抗体杂交瘤细胞再克隆化,筛选出高亲和力、特异性的克隆细胞,生产腹水型单抗,经纯化应用于高灵敏度的bFGF酶联免疫吸附检测(ELISA)方法的建立,为探讨bFGF单抗生产、纯化以及研究生物学作用提供高灵敏度的ELISA检测方法。方法:本实验将已建株的2H2和2B5注入Balb/c小鼠制备腹水型单抗,用Protein—A亲和层析方法纯化,再经SDS电泳和Western—blot分析纯化结果。以Sephadex G—200和DEAE—Sephorose Fast Flow纯化自制鼠抗bFGF血清。以碘化钠法对多抗进行辣根过氧化物酶(HRP)标记。2B5单抗作为包被抗体,酶标多抗作为检测抗体建立bFGF夹心酶联免疫吸附(ELISA)检测方法,对2组各十个样品进行了检测并进行统计学分析此方法的适合性和精密度,以2H2单抗建立bFGF的间接ELISA和竞争ELISA检测方法。结果:方阵滴定滴定法确定夹心ELISA检测方法中2B5单抗最佳包被浓度为1:80,酶标多抗最佳工作浓度为1:50,灵敏度可以达到1ng/孔,对100ng/孔级的bFGF样品的检测,适合性X2值=32.84,检测精密度为82%;对10ng/孔级bFGF样品的检测,适合性X2=3.10,精密度为82.9%。2H2单抗建立bFGF的间接ELISA和竞争ELISA检测方法,灵敏度可以达到1pg/孔。更多还原