钙调蛋白基因缺陷酵母菌株的构建和鉴定

【作者】 陈孙孝； 廖万清； 温海； 姚志荣； 邓安梅； 仲人前；

【机构】 上海第二军医大学长征医院皮肤科； 上海第二军医大学长征医院全军临床免疫中心；

【摘要】 目的:构建钙调蛋白基因（CMD1）缺陷HIS3酵母菌株,为进一步探讨钙调蛋白突变（cmd1）对真菌生长周期及致病性的影响奠定基础。方法:首先将含cmd1∷TRP1置换序列的质粒Ⅰ转化二倍体酵母菌株YRH501（His3trplural）,经Southern blot筛选出含TRP1序列的菌株,其次,符合CMD1序列的质粒TT转化以上TRP+菌株,进行减数分裂后选择得到TRP1+酵母菌株单倍体。最后,将含trp1∷HIS3置换序列质粒Ⅲ转化上述TRP+单倍体菌株,用His省却培养基培养得到钙调蛋白基因缺陷HIS3酵母菌株。结果:经Southernblot证实cmd1∷TRP1基因置换克隆;减数分裂后选择得到了TRP1酵母菌株单倍体;质粒Ⅲ转化单倍体后经省却His培养基培养得到CMD1缺陷HIS3菌株,接种于省却Trp培养基上未见有菌落生长,说明质粒Ⅲ转化单倍体后已将his3TRP1置换成HIS3trp1。结论:成功构建了钙调蛋白基因缺陷HIS3菌株,基因型为cmdltrp1HIS3。更多还原