应用限制性显示技术制备HIV基因片段的研究

【作者】 李凌； 马文丽； 朱利娜； 吴清华； 郭秋野； 郑文岭；

【机构】 第一军医大学分子生物学研究所； 广州总医院分子肿瘤学研究所；

【摘要】 <正> 目的:快速分离HIV-1基因片段制备、DNA芯片探针。方法:以Sau3AⅠ酶切HIV基因,得到许多大小适合芯片的限制性酶切片段。然后在片段两端接上接头,根据酶切位点、接头的序列设计通用引物。在该通用引物的3’端分别延伸—个碱基后,通过引物间的两两组合,将PCR反应分成10个亚组。纯化各组PCR产物,克隆到T载体上。阳性克隆经鉴定、扩大培养后提取质粒。以质粒为模板扩增靶片段并进行序列分析。结果:每个亚型得到了十几个100—1000 bp的HIV基因片段。结论:限制性显示技术是一种有效的快速制备基因片段的更多还原