柯萨奇B1组病毒基因疫苗的构建和实验应用

【作者】 赵铁强； 田野； 梁瑛娟； 钟照华； 孟繁超； 皮国华；

【机构】 哈尔滨医科大学第一临床医学院心内科；

【摘要】 <正> 柯萨奇B组病毒(CVB)是人类病毒性心肌炎的主要病原,目前尚缺乏有效的治疗措施。基因疫苗的出现为柯萨奇B组病毒感染的防治开辟了新的途径。 1 方法 1.1 基因疫苗的构建和鉴定:将CVB1病毒接种Vero细胞,培养收获后用TRIzol Reagent提取病毒RNA。逆转录PCR法扩增编码主要中和抗原的VP1基因,上下游引物分别为:5’-AGA TGC CAG TGG AAG tit CG-3’和5’-CGT CTA GAT TGT GGT AAT GTT TGA G-3’。分离纯化VP1基因PCR产物,与pMD18-T在T4 DNA连接酶作用下构建pMD18-T-VP1。进行酶切、PCR和测序鉴定。用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切pMD18-T-VP1和pCEP4,连接构建真核表达系统pCEP4-VP1,作为侯选的基因疫苗,用酶切、PCR和测序进行初步鉴定。更多还原