内皮细胞迁移法定量测定内皮抑素生物学活性的研究

【作者】 李永红； 张翊； 绕春明； 王军志；

【机构】 中国药品生物制品检定所生化室；

【摘要】 <正> [目的] 探讨用内皮细胞迁移法定量测定内皮抑素(endostatin)的生物学活性并用于该制品的检定工作。 [方法] 迁移试验使用Costar公司的24孔Transwell迁移板。HI-IEC细胞用含10％小牛血清的DMEM培养液传代培养,用含0.2％的小牛血清的培养液进行迁移试验。在迁移板的上下层槽中加入试验用培养液,置37℃、5％CO2培养箱中孵育1小时以上后使用。将样品从1mg/ml浓度进行10倍系列稀释,共8个稀释梯度,每个梯度设两个复孔。迁移板上槽中每孔加入总体积为100ul,含有不同稀释度的重组人内皮抑素以及2000个细胞的培养液;下槽加入总体积为600ul,含相应浓度的待测样品及60活性单位/mlbFGF的培养液。迁移板经37℃、5％CO2孵育24小时后将上层小槽取出,倾去迁移膜上层的细胞培养上清液,用更多还原