肝纤维化大鼠肝星状细胞和肝细胞胶原表达特征的实验研究

【作者】 张斌； 赵钢； 王灵台； 陈建杰；

【机构】 上海中医药大学附属曙光医院；

【摘要】 目的:探讨肝星状细胞和肝细胞在肝纤维化时过量合成肝脏胶原的作用、特征及中药抗纤复方减少胶原生成的作用机理.方法:以二甲基亚硝胺（DMN）复制大鼠肝纤维化动物模型,采用胶原酶消化法经门静脉灌注0.05%Ⅳ型胶原酶灌流液消化肝脏,分散肝脏细胞,分别以18%（w/v）Nycodenz和49.2%（V/V）淋巴细胞分离液为介质行密度梯度离心,分离正常大鼠和造模大鼠肝脏星状细胞和肝细胞,按TRIzol试剂盒提供的方法抽提大鼠肝脏组织和细胞总RNA,经甲醛变性凝胶电泳,转印至尼龙膜,以地高辛标记的α₁（Ⅰ）、α₁（Ⅲ）、α₁（Ⅳ）前胶原探针行Northern印迹分子杂交,检测星状细胞、肝细地和肝脏组织α₁（Ⅰ）、α₁（Ⅲ）、和α₁（Ⅳ）前胶原mRNA的表达特征.对造模大鼠以抗纤复方药液灌胃,以秋水仙碱治疗对照组大鼠,治疗后再分离星状细胞和肝细胞行胶原基因表达检测.结果:正常大鼠肝脏α₁（Ⅰ）、α₁（Ⅲ）和α₁（Ⅳ）前胶原mRNA均有少量表达,造模组大鼠肝脏前胶原mRNA表达量明显增加,α₁（Ⅰ）与α₁（Ⅲ）前胶原 mRNA表达量接近,α₁（Ⅳ）前胶原mRNA稍低.正常组大鼠肝星状细胞3种前胶原mRNA少量表达,I型和Ⅲ型前胶原mRNA表达量接近,Ⅳ型前胶原mRNA较少.造模组大鼠星状细胞3种前胶原mRNA表达增加,并其中以Ⅰ型mRNA表达稍多,Ⅲ型mRNA次之,Ⅳ型mRNA最少.正常组大鼠肝细胞未见Ⅰ、Ⅲ 、Ⅳ型前胶原mRNA阳性杂交信号,造模组大鼠肝细胞则有少量表达.抗纤复方对肝细胞、星状细胞和肝脏组织α₁（Ⅰ）、α₁（Ⅲ）、α₁（Ⅳ）前胶原mRNA表达均有抑制.其中Ⅰ和Ⅳ型前胶原mRNA的降低水平较秋水仙碱组明显.结论:正常肝细胞不表达胶原,肝纤维化时肝细胞与星状细胞共同参与了肝脏胶原的生成过程,抗纤复方同时影响肝脏间质细胞和实质细胞胶原基因的表达,减少肝脏胶原的生成.更多还原