【作者】 王军；

【导师】 吕智；

【作者基本信息】 山西医科大学 ， 骨科， 2012， 硕士

【摘要】 目的研究脂质体介导的TK/GCV系统联合普通化疗用于治疗骨肉瘤细胞的可行性。初步研究GCV联合常用化疗药物多柔比星对骨肉瘤mg-63细胞的杀伤作用。方法构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,培养和转染骨肉瘤细胞株mg-63,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,筛选稳定细胞系,MTT法检测GCV与不同浓度多柔比星联合应用对mg-63的杀伤作用。结果1.成功构建重组质粒pIRES-EGFPtk并将tk导入mg-63,获得稳定表达。2.荧光显微镜下观察mg-63(TK+)呈现绿色荧光。3.流式细胞仪检测转染率在61%。4.GCV(10μ g/ml)可明显抑制mg-63(tk+)的生长,多柔比星最低有效浓度为(1μ g/ml)；联合应用GCV μ g/ml与多柔比星0.25μ g/ml对mg-63(tk+)时对骨肉瘤细胞株有明显杀伤作用。结论通过本实验观察脂质体介导的TK/GCV系统与普通化疗药物多柔比星联合应用对骨肉瘤细胞生长的影响。结果发现在GCV为5μ g/ml时(小于其有效杀伤浓度),低浓度多柔比星(0.25μ g/ml)即能表现出对mg-63细胞生长明显的抑制作用。与单用多柔比星相比,其对mg-63细胞的有效杀伤浓度降低了4倍。这可以有效减低多柔比星的使用剂量,降低起其毒副作用。其具体原因可能与两种药物不同的作用机制有关。GCV主要通过其磷酸化产物抑制DNA聚合酶的活性来杀伤肿瘤细胞；多柔比星则主要通过上调凋亡基因rd4和rd5与DNA结合破坏其模板功能,并不改变内在酶活性。结果提示,通过脂质体介导的TK/GCV与多柔比星的联合应用或能提高耐药性肿瘤细胞对化疗药的敏感性.这或许能为骨肉瘤的治疗提供一定实验基础。更多还原

【Abstract】 AIMTo investigate the killing effect of TK/GCV system combined with doxorubicin on humanteosarcoma cells and study the efficiency of killing the human osarcoma cells by TK/GCV system combined with doxorubicin.Methordsplasmid pIRES-EGFP-tk.and transfect osteosarcoma cell line mg-63, cell circle analysis and under fluorescence microscopy observe cell growth features,then add the GCV and doxorubicin,study the efficiency of killing the osteosarcoma cells by TK/GCV system combined with doxorubicin.Results1. Successful construction restructuring plasmid pIRES-EGFP-tk, The results showed that TK gene was integrated into mg-63cells.2.Observed under fluorescence microscope mg-63(TK+) showing green fluorescence.3.Flow cytometric detection ZhuanRan rates in61.4.The growth of mg-63(tk+) cells was greatly inhibited by GCV administration, with1mg/l as lowest concentration. Doxorubicin killed mg-63cells at concentration of1mg/l. When combined with low concentration of GCV5μg/ml the doxorubicin can be decreased to0.25μg/ml.更多还原